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LightCycler®至適化

ロシュ・ダイアグノスティックス社との契約のもと、1999年よりカローセルタイプのLightCycler®(ST300および2.0)、2007年よりプレートタイプのLightCycler®480の至適化サービスを提供してまいりました。今回新たに発売されたLightCycler® Nanoの至適化サービスを開始いたします。

我々の長年蓄積したリアルタイムPCR技術によりLightCycler®、LightCycler®480およびLightCycler®Nanoを使用した高品質なアプリケーションをご提供します。

LightCycler® Nanoシステム

32ウェルの再現性の高い優れた温度制御を低価格で実現。コンパクトなサイズと静かな作業ノイズ（40dB以下）サーマルサイクルに従いフタの色がLEDにより変化し、あなたのベンチを美しく彩ります

弊社所有のLightCycler®Nanoによる動作

LightCycler®Nanoの詳細は

ロシュ・ダイアグノスティックス社 LightCycler®Nano System サイトへ

至適化サービス内容

対応可能な機種

機種	タイプ	反応数
LightCycler®ST300 LightCycler®2.0	キャピラリー	32反応
LightCycler®480	プレート	96 or 384 ウェル
LightCycler® Nano^NEW	チューブ	32反応

アプリケーション（例）

目的	方法
遺伝子発現定量(mRNA定量)	1step qRT-PCR
遺伝子発現定量(mRNA定量)	2step qRT-PCR
DNA 定量	qPCR
CNV解析遺伝子増幅ウイルス・微生物定量	qPCR
SNP解析	HybProbeによる融解曲線分析
SNP解析	HRM法
変異DNA定量	ご相談ください。
オルタナティブスプライシングバリアントに特異的な定量	ご相談ください。
※上表以外のアプリケーション（マルチプレックスPCRなど）も可能です。ご相談ください。

作業内容

プライマー（およびプローブ）デザイン
プライマー（およびプローブ）の合成
反応条件のセットアップ
スタンダードの作製（PCR産物の精製物,定量解析の場合のみ）
※送付いただいたポジティブサンプルをもとの反応条件のセットアップを行います。
　　実験予定のサンプル（2サンプルまで）を試し測定いたします。

納品物

プライマー（およびプローブ）
スタンダードDNA（定量解析の場合のみ）
反応条件

生物種

全ての生物種にご対応いたします。

例）ヒト、マウス、ラット、ウシ、ブタ、ニワトリ、ゼブラフィッシュ、ショウジョウバエ、シロイヌナズナ、イネ、真菌、バクテリア、ウイルス他

検出方法

下記のいずれかの検出方法を選択できます。

インターカレータ(SYBRGreenⅠ)法
HybProbe法
加水分解プローブ法

HybProbe法の3つの特長

2種類のプローブにより検出するため特異性が高い。
蛍光の取得には2つのプローブが増幅産物にハイブリダイズする必要があるため、1種類のプローブよりも信頼性が高いといえます。
アンプリコンサイズが長い場合も使用できる。
加水分解プローブのようにアンプリコンサイズと5'末端の塩基の制約がありません。
オルタナティブスプライシングバリアントや相同性遺伝子によりアンプリコンサイズを短く設定できない場合も、使用可能です。
融解曲線分析により多型解析や変異検出が可能。
プローブ領域に多型や変異がある場合は、プローブと増幅産物の間の融解温度が低温度側にシフトします。そのため、融解曲線分析を行うことにより、多型解析や変異検出が可能です。

HybProbe法の原理

5'-末端がLCRedで標識されたプローブと3'-末端がフルオレセインで標識されたプローブが増幅産物にハイブリダイズする結果、 2つのプローブが近接し、蛍光物質間に蛍光共鳴エネルギー転移 (FRET)が起こります。
ドナー色素であるフルオレセインはLightCycler®の光源により励起され、その励起エネルギーの一部をアクセプター色素であるLCRedに転移し、LCRedから蛍光が発光します。LCRedの蛍光をLightCycler®で測定します。

価格/納期

下表は標準的なアプリケーションの価格と納期です。
下表以外のアプリケーションは、内容に応じて価格と納期をお見積します。

アプリケーション	価格	納期
mRNA定量(2step, SYBRGreenⅠ使用)	\60,000	サンプル到着から2週間
mRNA定量(2step, HybProbe使用)	\84,000	サンプル到着から3週間
mRNA定量(2step, 加水分解プローブ使用)	\84,000	サンプル到着から3週間
DNA定量(2step, SYBRGreenⅠ使用)	\50,000	サンプル到着から2週間
DNA定量(2step, HybProbe使用)	\74,000	サンプル到着から3週間
DNA定量(2step, 加水分解プローブ使用)	\74,000	サンプル到着から3週間

※税別価格です。消費税が別途かかります。

ご準備いただくもの

条件検討用にポジティブサンプルの送付が必要です。

アプリケーション	送付内容
mRNA定量(2step, SYBRGreenⅠ使用)	Total RNA 30μg
mRNA定量(2step, HybProbe使用)
mRNA定量(2step, 加水分解プローブ使用)
DNA定量(2step, SYBRGreenⅠ使用)	Genomic DNA (10ng/μL)30μL
DNA定量(2step, HybProbe使用)
DNA定量(2step, 加水分解プローブ使用)

送付サンプルの詳細につきましては、お申込み後、メールにてご案内します。

LightCycler®480 Dual-Plex至適化

LightCycler®480は多くの蛍光色素を検出することができ、マルチプレックスPCRアッセイに非常に適しています。
私たちの蓄積したマルチプレックスPCRの知見を基づき、 Dual-Plexによる遺伝子定量解析およびSNP解析系をご提供します。

ご依頼内容に応じて
最適な検出方法(HybProbe法あるいは加水分解プローブ法)と蛍光色素をご提案します。

対応可能なアプリケーション

目的	方法
遺伝子発現定量(mRNA定量)	1step qRT-PCR
遺伝子発現定量(mRNA定量)	2step qRT-PCR
DNA定量	qPCR
CNV解析遺伝子増幅ウイルス・微生物定量	qPCR
SNP解析	HybProbeによる融解曲線分析

代表的な蛍光色素

レポーター/クエンチャー	Ex / Em
5'-6FAM / 3'-ATTO540Q	494 / 525
5'-6HEX / 3'-ATTO540Q	535 / 556
5'-6HEX / 3'-BHQ-1®	535 / 556
5'Yakima Yellow / 3'-BHQ-1®	530 / 549
5'-LightCycler®480Cyan500 / 3'-BHQ-1®	450 / 500
5'-6FAM / 3'-BHQ-1®	483 / 533
5'-LightCycler®Yellow555 / 3'-BHQ-1®	535 / 568
5'-LightCycler®Red610 / 3'-BHQ-2®	558 / 610
5'-LightCycler®Red670 / 3'-BHQ-2®	615 / 670